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PROTOCOLO:   MÉTODO   LAVINA

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Por Ivone de Paulo
 ::  Método de Impregnação Lavina ::  (parecido com o Método de Golgi)

 

     1) Misturar partes iguais da solução A e solução B na hora do uso, logo após a perfusão.  Deixar o encéfalo refixando nesta mistura por 3 a 5 dias.

 

Solução A

- 10 mL formol

- 90 mL H2O

- 5 g de cloreto de cálcio

Solução B

3 g de bicromato de K

100 mL H2O

 

     2) Impregnar com nitrato de prata a 1,5%, 2 dias ou mais (até uma semana, dependendo do tamanho do tecido – não é aconselhável peças maiores que 0,8 mm de largura)

      3) Lavar

      4) Manter em solução de sacarose 20% em tampão fosfato

      5) Obtenção das secções   em criostato, com espessura de 15 a 10 mm

     6) Colocar os cortes em formol 5% com carbonato de Na 1%, na proporção 1:1, na momento do uso. Neste momento, adicionar 1 mL de sulfeto de sódio a 1%

      7) Lavar

      8) Desidratar, diafanizar, montar com bálsamo normal

      9) Opcional – corar com um pouco de hematoxilina

 

OBS.:  Por meio desta coloração obtemos coloração de algumas células (nem todas coram).  Esse fato se deve ou a particularidade de cada neurônio ou  à técnica empregada, não é sabido.

Caso alguém possua um outro protocolo que traga bons resultados de marcação agradeceríamos se nos enviasse.

 

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