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O MET possui
sistemas de iluminação e vácuo que produz feixes de elétrons de alta
energia (energia cinética), que ao incidir sobre uma amostra de tecido
ultrafina (na espessura de nanométro*), fornece imagens planas, imensamente
ampliadas, possuindo a capacidade de aumento útil de até um milhão de vezes
e assim permitindo
a visibilização de moléculas orgânicas, como o DNA, RNA, algumas proteínas,
etc. O sistema de vácuo remove o ar e outras moléculas de gás da
coluna do microscópio, evitando assim que ocorra erosão do filamento e propiciando a
formação de uma imagem com excelente qualidade e contraste. A imagem é
projetada em um anteparo fluorescente, que poderá ser redirecionada para uma
chapa fotográfica para registro, ou ainda a imagem pode ser captada por um
sistema computadorizado de captação de imagens e armazenada em CD-Rom para
futura análise.
Grande parte dos átomos das estruturas celulares tem baixo número atômico e
muito pouco contribui para a formação da imagem. O emprego de
substâncias que contêm átomos pesados, como ósmio, chumbo e urânio permitem
obter um contraste entre as estruturas celulares, contribuindo para uma
melhor imagem. Então, por fim, a imagem é também uma resultante da absorção
diferenciada de elétrons por diversas regiões da amostra, seja por variação
de espessura, seja por interação com átomos de maior ou menor número
atômico.
Análises morfológicas, caracterização de precipitados e determinação de
parâmetros de rede.
- Fixar o
material por perfusão e/ou imersão;
- O fragmento
geralmente é embebido em tetróxido de ósmio, depois passa por por processos
de lavagens, desidratado em concentrações crescentes de alcool e imerso em
resina (apon, araldite...), onde permanece até a polimerização;
- O excesso de resina
polimerizada é retirado para expor o material de estudo e permitir o seu
fatiamento no ultramicrotomo**;
- As fatias ultrafinas
são colocadas em telas de cobre ou níquel***, e são contracoradas geralmente
com uranila e chumbo;
- Após a obtenção de
fotografias, caso não haja um sistema de captação de imagens para CD-Rom,
segue-se com a revelação do negativo, revelação e ampliação das fotografias.
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Análise dos dados.
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* nanometro (nm) = milionésima parte do milímetro, ou
seja, se eu dividir 1 milímetro em um milhão de vezes, terei espessuras
em nanometros.
**ultramicrotomo = aparelho capaz de fatiar o
material em espessuras na ordem de nanometro ou micrometro.
*** telas de cobre ou níquel = as telas de cobre
são mais baratas e utilizadas quando não há necessidade da realização de
imuno-histoquímicas posteriormente, caso haja pretensão de realizar a
imuno-histoquímicas devem ser utilizadas telas de níquel que não oxidam. |
