Por Thiago Zaqueu de Lima

Acetilcolinesterase, Modificado de Gomori, G (Microscopic Histochemistry)

Sulfato de cobre (CuSO₄.5H₂0)..............................................1,5g Glicina.....................................................................................1,875g

Cloreto de magnésio (MgCl₂.H₂O)..........................................5,0g

Ácido maléico..........................................................................8,75g

Hidróxido de sódio...............................................................150 mL

Na₂SO4 saturado à temperatura elevada (aprox. 40 ºC)........850 mL

pH 6,0

*Manter em geladeira (preservação indefinida)

Solução estoque......................................................250 mL

Iodeto de acetiltiocolina ..........................................250 mg

Inibidor ISO OMPA*..................................................2,5 mL

*Inibidor para colinesterase não específica

ISO OMPA: tetraisopropilpirofosforamida

Solução estoque...........................................................10,26 mg/100 mL (3x10^-6)

OBS: guardar em geladeira.

    1) 10 min. em salina 10% (at´ficar sem sangue algum, caso ultrapasse 10 min. não há problema).

2) 20 min. de fixador.

Para 1L, aquecer 490 mL de água destilada a 56 ºC e acrescentar 40 mg de PFA, adicionar 490 mL de solução tampão fosfato 0,2M pH 7,4 e finalmente,  acrescentar 20mL de glutaraldeído 25%.

Conservar os cérebros em solução fixadora antes de cortar : deixar na solução fixadora mais sacarose a 30 % até o cérebro abaixar (em geladeira).

1)  Cortar em criostato : 10.20 ou 30 mm, coletando as lâminas gelatinadas.

2)  Lavar com 3 banhos de Na₂SO₄ saturado (um mergulho em cada).

3)   Pré-incubar em Na₂SO₄ saturado mais ISSO OMPA, em temperatura ambiente por 30 minutos [Na₂SO₄ (250 mL); ISO OMPA (2,5 mL)]

4)   Incubar por 1h a 37 ºC, em 250 mL de solução estoque com 250 mg de iodeto de acetiltiocolina e 2,5 mL de ISSO OMPA.

5)   Lavar em 3 trocas de Na₂SO₄ saturado (os mesmos do item 2).

6)   Revelar em sulfeto de amônio diluído (250 mL de Na₂SO₄ saturado; 10-15 gotas de CuSO₄ iM; 10-15 gotas de (NH₄)₂S 1M.

7)   Lavar em água destilada.

8)   Intensificar em nitrato de prata a 10% (1 min.).

9)   Lavar em solução de tiossulfato de sódio a 5% (Na₂S₂O₃.5H₂O) por 1 min.

10) Lavar em água destilada.

11) Contracorar com hematoxilina de Mayer.

12) Desidratar, diafanizar e montar.

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